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Mise à jour : 27-03-2018

Thème : Diagnostic Prénatal Non Invasif (DPNI)

Les techniques de biologie moléculaire permettent aujourd’hui d’envisager des diagnostics sur le fœtus sans procéder à des prélèvements fœtaux invasifs mais en utilisant soit les fragments d’ADN fœtal libres circulants (cell-free fœtal DNA ; cff-DNA) soit les cellules fœtales trophoblastiques circulantes (CFTC) présentes dans le sang maternel (Figure):


Principe du DPNNI
Principe du DPNNI

ADN fœtal libre circulant (cff-DNA)

Des méthodes de DPNI (Lo et al. 1997; Lo et al. 1998) ont été développées à partir de cff-DNA, source alternative de matériel génétique fœtal présent dans le sang des femmes enceintes. L’étude de ce cff-DNA apporte de clairs bénéfices en pratique clinique dans un dépistage précoce et améliore la sécurité du DPN, en s’affranchissant du risque de perte fœtale dû aux prélèvements invasifs (Bustamante-Aragonés et al. 2012; Daley et al. 2014; Ferrari et al. 2015). Le développement du DPNI pour les maladies monogéniques nécessite la mise au point de tests à façon, propre à une maladie voire à un patient donné. On distingue deux catégories de tests :
  • les tests qualitatifs qui consistent à rechercher des séquences géniques fœtales absentes ou différentes du génome maternel (MEMO_PCR_Analyse de fragments, ddPCR...)
  • les tests à la fois qualitatifs et quantitatifs impliquant l’utilisation d’outils de biologie moléculaire de seconde génération (séquençage haut débit) qui permettent la recherche de l’allèle maternel hérité par dosage relatif de mutation (RMD) ou d’haplotype (RHDO).
Le nombre de tests actuellement proposé et/ou en cours de développement dans l’unité est limité à un petit nombre d’applications cliniques :
  • la détermination du sexe fœtal (séquences spécifiques du chromosome Y)
  • le suivi de maladies liées à la grossesse, telle que l’allo-immunisation fœto -maternelle (recherche de plusieurs exons du gène RHD : en cours de développement dans l’unité)
  • - le diagnostic d’exclusion de maladies monogéniques par recherche de l’allèle paternel muté (Mucoviscidose, p.Phe508del) ou d’un allèle muté de novo (Achrondroplasie, mutation récurrente du gène FGFR3 : c.1138G>A, p.Gly380Arg, en cours de développement dans l’unité)

Cellules Fœtales Trophoblastiques Circulantes (CFTC):

Une approche non invasive alternative à l’analyse de cff-DNA est l’étude des CFTC. En effet, les difficultés techniques liées aux caractéristiques du cff-DNA ne permettent pas la recherche de l’ensemble des mutations incriminées, en particulier des mutations à expansion de triplets. Un projet de recherche clinique est en cours (projet DIACCIMEX) pour compléter notre offre de DPNI en développant une approche adaptée à l’analyse des mutations non détectables sur cff-DNA telles que les expansions de triplets grâce à l’isolement spécifique des CFTC par des systèmes actuellement utilisés pour l’isolement des cellules tumorales circulantes puis à l’analyse moléculaire sur cellule unique. (ClinicalTrials). Les premiers tests de DPNI MMG font leur entrée dans les laboratoires de diagnostic moléculaire avec un accueil très favorable. Toutefois les challenges technologiques restent nombreux du fait de la diversité des besoins (mutations et pathologies nombreuses) et de l’expertise analytique requise, imposant le choix constant de solutions innovantes et leur validation clinique selon un processus rigoureux.

  • Personnel

  • Marie-Claire VINCENT (PhD, PharmD,PH CHU Montpellier)

    Claire GUISSART (PhD, PharmD, PH contractuel CHU Montpellier, projet DIACCIMEX)

    Sandra PIERREDON (Ingénieur Recherche, CHU Montpellier, projet DIACCIMEX)

    Abigail DELORT (TL CHU Montpellier)

  • Mots clés : Diagnostic Prénatal Non invasif, maladies monogéniques, ADN libre circulant,
    cff-DNA, CFTC (Cellules Foetales Trophoblastiques Circulantes), MEMO PCR, ddPCR

  • Accès

  • Soutiens financiers :
    • ABM AOR-2012 : "Diagnostic Prénatal Non Invasif (DPNNI) de la Mucoviscidose par MEMO-PCR en temps réel"
    • ABM AOR-2015 : "Evaluation du dosage relatif de mutation dans le diagnostic prénatal non ivasif de la mucoviscidose par séquençage haut débit sur une plateforme MiSeq (Illumina)"
    • PHRC inter-régionnal 2016 : "DIagnostic Anté-natal sur Cellules fœtales trophoblastiques CIrculantes (CFTC) de Maladies à EXpansions de triplets à partir de sang maternel" DIACCIMEX"
  • Publications sélectionnées :
  • Guissart C, Debucs C, Raynal C, et al (2017) Non-invasive prenatal diagnosis (NIPD) of cystic fibrosis: an optimized protocol using MEMO fluorescent PCR to detect the p.Phe508del mutation. J Cyst Fibros 16:198-206 PMID:28040480

    Vincent MC. Tests non invasifs et maladies géniques : que peut on faire ? Rev. Méd. Périnat. 2016 8: 18-25. DOI : 10.1007/s12611-016-0352-1

    Guissart C, Debant V, Desgeorges M, Bareil C, Raynal C, Toga C, Pritchard V, Kœnig M, Claustres M, Vincent MC. Non-invasive prenatal diagnosis of monogenic disorders: an optimized protocol using MEMO qPCR with miniSTR as internal control. Clin Chem Lab Med 53:205-15. PMID: 25274949