L'épissage des ARN pre-messagers dans la cellule eucaryote est un processus complexe basé sur la reconnaissance coordonnée de multiples signaux (introniques et exoniques) par un ensemble de protéines au sein du spliceosome. Les séquences auxiliaires d'épissage (activatrices ou inhibitrices) situées en dehors des sites consensus d'épissage jouent un rôle déterminant dans la régulation de l'épissage constitutif et alternatif des gènes.

L'objectif principal de notre travail est d'étudier les mécanismes qui président aux choix des sites d'épissage dans le gène DMD en conditions normale et pathologique.

• Les mutations du gène DMD sont responsables de la dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) et d'une forme modérée de la maladie, la dystrophie musculaire de Becker (BMD). Nous nous intéressons plus particulièrement aux mutations exoniques associées à des anomalies d'épissage (saut d'exon) et qui modulent la sévérité du phénotype. Notre objectif est de caractériser les complexes protéiques et séquences cis mis en jeu dans ces épissages aberrants par des techniques d'analyse des interactions ARN/protéines et des analyses fonctionnelles.


• D'autre part, notre objectif est de caractériser les principaux facteurs impliqués dans la régulation de l'épissage physiologique (condition normale) du pré-ARNm DMD dans un modèle cellulaire humain par la réalisation d'un crible fonctionnel par interférence ARN (ARNi) et l'analyse des profils d'épissage du transcrit DMD par RNA-seq ciblé. Pour les principaux facteurs ainsi identifiés, nous explorons les mécanismes moléculaires mis en jeu (sites de liaison à l'ARN, rôle de la structure secondaire, synergie/antagonisme avec d'autres facteurs d'épissage, ...) grâce à des approches fonctionnelles et biochimiques.

• Personnel

Sylvie TUFFERY-GIRAUD (IR Université Montpellier + HDR)

Julie MIRO (IE Université Montpellier)

Dylan DA CUNHA (Master 2 Recherche)

• Mots clés : Duchenne Muscular Dystrophy (DMD), épissage alternatif, RNA Binding Proteins (RBPs), crible fonctionnel, RNA-seq, séquences cis/facteurs trans


• Accès

• Publications sélectionnées

Miro J, Bourgeois C.F, Claustres M, Koenig M, Tuffery-Giraud S. (2018) Identification of splicing factors involved in DMD exon skipping events using an in vitro RNA binding assay. Methods Mol Biol. 1687:157-169. PMID: 29067662

Tuffery-Giraud S, Miro J, Koenig M, Claustres M. (2017) Normal and altered pre-mRNA processing in the DMD gene. Hum Genet. 36(9):1155-1172. Review. PMID: 28597072

Bougé AL, Murauer E, Beyne E, Miro J, Varilh J, Taulan M, Koenig M, Claustres M, Tuffery-Giraud S. (2017) Targeted RNA-Seq profiling of splicing pattern in the DMD gene: exons are mostly constitutively spliced in human skeletal muscle. Sci. Rep. 7:39094. PMID: 28045018

Miro J, Laaref AM, Rofidal V, Lagrafeuille R, Hem S, Thorel D, Mechin D, Mamchaoui K, Mouly V, Claustres M, Tuffery-Giraud S. (2015) FUBP1: a new protagonist in splicing regulation of the DMD gene. Nucleic Acids Research Advance Access published February 6, 2015. PMID: 25662218

Messaoud Khelifi M, Ishmukhametova A, Khau Van Kien P, Thorel D, Méchin D, Perelman S, Pouget J, Claustres M, Tuffery-Giraud S. (2011) Pure intronic rearrangements leading to aberrant pseudoexon inclusion in dystrophinopathy: a new class of mutations? Hum Mutat. 32(4):467-75. PMID: 21305657